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詳解兩款POCT核酸產品:Sense PK 優思達

日期:2021-04-25
Sense Biodetection Limited(Sense),來自英國牛津和劍橋的分子診斷公司。他們的口號是:

2021年4月20日,Sense Biodetection宣布,已籌集了5,000萬美元的B輪融資,以支持其Veros COVID-19快速分子測試的商業化以及不斷發展的無儀器測試產品組合。要素如下:

  • 總部位于英國阿賓登
  • 快速等溫擴增技術Veros平臺,用于POCT檢測各種疾病
  • Veros測試是一次性的

正在開發的新冠核酸檢測試劑如下:

Sense的Veros?SARS-CoV-2是一項簡單的一次性測試,使用鼻拭子樣本即可提供超快速的結果,而無需復雜的硬件進行溫度循環和熒光檢測。作為分子測試,其性能與金標準實驗室測試相當,并且可在10分鐘內獲得結果。

看到這里,立馬想到了優思達在CACLP上展示的家用POCT核酸試劑。采用交叉引物恒溫擴增CPA技術,裝置自帶電源,同時檢測新冠,甲流,乙流和人源內標

操作過程:

  • 抽提液加入加樣孔
  • 按下啟動鍵
  • 反應30分鐘
  • 打開加樣孔,加入清洗液,靜置5分鐘
  • 讀結果

兩相比較:
最大的差異是:10分鐘?VS?35分鐘
不過sense 還沒上市。

原理圖如下,來自Sense的專利,切口酶恒溫擴增反應技術(NEAR)??

最后檢測是通過碳顆粒標記的層析試紙。
以下關于NEAR來自?知乎切刻內切酶(NEAR)恒溫擴增是目前相關研究最少的一種恒溫核酸擴增技術。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人員開發并申請專利的(Brain等2009)。Ionian是加州的初創公司,成立于2000年,在2010年被Alere收購。而后Alere在2017年被雅培收購,NEAR成為雅培的專利。
NEAR是一種鏈置換放大技術,其原理是在核酸切刻內切酶切刻形成的裂口處,通過聚合酶的作用以dNTPs為原料從裂口處的3’端聚合延伸,置換出等位的DNA鏈,由此又形成了新的完整的含有切刻酶識別位點的DNA序列。這條雙鏈再次被核酸切刻內切酶識別切割,進而開始“聚合-切刻”的循環,產生大量被置換下來的DNA單鏈,形成指數級擴增。
NEAR的優點:①速度快(最快5分鐘可以得到陽性結果);②靈敏度高(初始只需要數百個病毒拷貝);③區別于引物設計較復雜的LAMP技術,NEAR技術反應形式多樣,可滿足不同的擴增需求;④反應穩定性好
NEAR的缺點:①短序列的設計存在高假陽性的可能;②儀器的通量很小,一次只能檢測一個樣本;③反應機制復雜、產物產量易受擴增模板限制,使得后期擴增從指數增長變為線性增長;④檢測的重復性略低于qPCR;⑤NEAR恒溫擴增技術的特異性與靈敏度依賴于分子信標引物和Nicking酶,分子信標引物的設計難度大,Nicking酶與其他恒溫擴增酶一般都普遍比傳統的實時熒光PCR酶要貴,故在檢測成本和應用范圍等方面,NEAR恒溫擴增技術遜于qPCR。
被雅培收購的Alere是唯一一家使用NEAR技術開發人類疾病診斷試劑盒及儀器的公司。Alere的Influenza A和B的檢測試劑盒最快5min檢出陽性,7min陽性檢出率95%,13min可以確定陰性。另一個關于StrepA的檢測試劑盒最快2min檢出陽性,3min陽性檢出率99%,6min可以確定陰性。這是關于Flu和StrepA最快的分子的檢測試劑盒,但ID NOW儀器的通量很小,一次只能檢測一個樣本。目前的新冠疫情下,實驗室的大量檢測仍然需要依賴傳統高通量qPCR的批量檢測,ID NOW無法對于大量樣本的檢測能力提升帶來較大的幫助。而ID NOW屬于POCT范疇,在醫生辦公室、緊急護理診所和醫院急診科等廣泛的醫療場景中都可以進行檢測,可以起到一定的市場補充作用。
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