昨天在群里討論“定性產(chǎn)品最低檢測(cè)限”的問題，不知不覺打成了長(zhǎng)篇大論，基于自己注冊(cè)和研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，再結(jié)合一些具體產(chǎn)品來(lái)談?wù)勎业睦斫狻?/span>

定量產(chǎn)品是呈現(xiàn)出一系列的數(shù)值結(jié)果，結(jié)合廠家研究以及醫(yī)院各自的臨床實(shí)踐結(jié)果，確定一系列的指標(biāo)：空白限，陽(yáng)性判斷值，參考范圍，線性范圍等。膠體金產(chǎn)品也可以根據(jù)T、C線的變化，配合讀條儀做成定量的形式（目前熒光層析定量方法是主流）：

而定性產(chǎn)品的結(jié)果呈現(xiàn)形式就兩種“有”或“無(wú)”，如下圖：

定性產(chǎn)品的最低檢測(cè)限、參考范圍、陽(yáng)性判定值等研究都隱藏在T線里面。比如夾心法項(xiàng)目，無(wú)T線就是陰性，代表被測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限或者為0，是正常結(jié)果；出線就是陽(yáng)性，代表被測(cè)物濃度在最低檢測(cè)限之上。

從注冊(cè)角度說(shuō)

新冠抗體檢測(cè)，是個(gè)定性試劑，一個(gè)“確定的”陽(yáng)性樣本，稀釋一定的梯度，測(cè)N次還能以95%以上的幾率檢出陽(yáng)性結(jié)果來(lái)，這個(gè)點(diǎn)就是最低檢測(cè)限。這是一個(gè)固定的套路，按套路來(lái)的好處：

• 一是廠家好操作（特殊情況除外），即使你心里沒譜，按這個(gè)原則去操作也就對(duì)了；

• 二是方便審評(píng)，都按照這個(gè)套路來(lái)，符合就給你批了，不符合就斃了，省事兒。

  
  

從研發(fā)的角度說(shuō)

在一定程度上，最低檢測(cè)限可以反映一個(gè)試劑的臨床預(yù)期效果。舉個(gè)非特殊情況的例子，比如HCG這種產(chǎn)品，臨床要求25mIU/ml能夠檢出，別的廠家20能檢出，你做到10能檢出，那么理論上，你的產(chǎn)品比其他廠家更靈敏，臨床預(yù)期使用效果更沒問題。這是一個(gè)理想的狀態(tài)，首先HCG這個(gè)東西，其天然抗原可以穩(wěn)定制備出來(lái)，其次人與人之間基本沒有個(gè)體差異，這樣就容易獲得標(biāo)準(zhǔn)品，大家都按標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)做研究，最低檢測(cè)限按照指導(dǎo)原則那樣稀釋檢測(cè)就沒問題了，不同廠家的橫向比較結(jié)果也有說(shuō)服力。這種理想狀態(tài)下的最低檢測(cè)限研究，類似于大家都在同一賽道上飆車，跑得快的就是好的，別人開卡丁車，你可以開F1去降維打擊。

再比如“一般特殊”情況下的PCT，我們很難制備穩(wěn)定的天然抗原，一般都是用重組抗原。由于不同抗體識(shí)別位點(diǎn)的差異，會(huì)導(dǎo)致不同廠家的試劑，對(duì)同一重組抗原的反應(yīng)存在明顯的強(qiáng)弱差異，甚至完全沒反應(yīng)也正常。這時(shí)我們就不能簡(jiǎn)單的根據(jù)一個(gè)重組抗原的結(jié)果去評(píng)判試劑的性能，更沒法預(yù)期其臨床使用效果。在這種情況下，第一個(gè)吃螃蟹的人，比如BRAHMS用自己合成的重組抗原PTN47（47個(gè)氨基酸）去定標(biāo)，然后再大量的測(cè)臨床樣本，然后得到一系列數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)再跟臨床應(yīng)用結(jié)合起來(lái)，推測(cè)結(jié)果和疾病關(guān)系等，比如0.5ng/ml以上判定是陽(yáng)性，其有細(xì)菌感染或膿毒血癥的風(fēng)險(xiǎn)，2-10可能全身感染，10以上膿毒性休克。之后再用重組抗原結(jié)合臨床樣本來(lái)把這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)傳遞下去，來(lái)保持其產(chǎn)品的一致性。即使他后來(lái)合成了更接近天然抗原（116個(gè)氨基酸）的第二代參考物質(zhì)PCT115（115個(gè)氨基酸），為了檢測(cè)結(jié)果的延續(xù)性，他產(chǎn)品還是溯源到第一代的PTN47上去，這就是第一個(gè)吃螃蟹的人溯源過程。所謂前人種樹后人乘涼，后來(lái)者可以結(jié)合BRAHMS的臨床結(jié)果來(lái)給自己的系統(tǒng)定標(biāo)賦值，打造自己的溯源鏈。如果大家都以第一個(gè)人的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)，那么也相安無(wú)事，如果有人不服他，自己?jiǎn)瘟€(gè)標(biāo)準(zhǔn)，那么臨床上結(jié)果打架也是常有的事。如果溯源標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，但是每個(gè)廠家有各自的參考范圍和判斷值，在臨床應(yīng)用上也不存在問題。（當(dāng)然樣本降解引起的不一致另說(shuō)，這是PCT和心臟標(biāo)志物檢測(cè)的常見問題，其根本原因也在于抗體識(shí)別位點(diǎn)的差異。）

雖然不能拿重組抗原來(lái)橫向比較，但是好在PCT這個(gè)東西本身沒啥個(gè)體差異（降解另說(shuō)），所以最低檢測(cè)限的研究也可以直接用已注冊(cè)產(chǎn)品測(cè)的定值血清去稀釋檢測(cè)，這樣得出的結(jié)果也能反應(yīng)你的產(chǎn)品與對(duì)比試劑究竟誰(shuí)更靈敏。

具體到新冠抗體這個(gè)項(xiàng)目

那又是“特別特殊”的一種情況了，這是測(cè)抗體的項(xiàng)目，別說(shuō)新發(fā)生的新冠，就算流行多年的甲乙肝、torch類，所有的抗體檢測(cè)項(xiàng)目，在臨床上也很難統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)橐话闱闆r下，我們都是選取優(yōu)勢(shì)表位來(lái)制備重組抗原來(lái)生產(chǎn)試劑，進(jìn)而檢測(cè)抗體。由于重組抗原片段的選擇，以及人體免疫應(yīng)答的個(gè)體差異，臨床上會(huì)有很多樣本，因?yàn)槭褂貌煌瑥S家的試劑（重組抗原差異）表現(xiàn)出明顯的檢測(cè)差異，有強(qiáng)弱相反的，甚至極端情況下陰陽(yáng)相反。那么在這種情況下，對(duì)于臨床預(yù)期來(lái)說(shuō)，最低檢出限的意義就很低了，這也就是群友討論的出發(fā)點(diǎn)，這種官話式的指導(dǎo)原則，形式化的操作方式，對(duì)企業(yè)開發(fā)一個(gè)好的產(chǎn)品，形成一個(gè)可操作性的標(biāo)準(zhǔn)幾乎沒啥指導(dǎo)意義，其僅限于滿足注冊(cè)要求。

實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題

比如人感染病毒后，可能產(chǎn)生ABC三種抗體，抗體有的多有的少，甲廠家的產(chǎn)品能識(shí)別出AB兩種抗體，乙廠家能識(shí)別出BC抗體，拿一個(gè)B抗體數(shù)量多的人的血樣來(lái)做最低檢測(cè)限研究，甲乙廠家性能相當(dāng)；如果研究用的樣本中抗體A多而抗體B少，那么稀釋后檢測(cè)甲廠家的最低檢測(cè)限可能會(huì)明顯好于乙廠家。如果一個(gè)很特殊的樣本AB抗體都很少，C抗體卻很多，那么甲的產(chǎn)品在臨床上還會(huì)出現(xiàn)漏檢的情況。這只是簡(jiǎn)單舉例，其他的比如方法學(xué)差異（夾心法和間接法）、產(chǎn)品工藝、用于稀釋的陰性樣本基質(zhì)問題（無(wú)關(guān)抗體含量），都會(huì)對(duì)稀釋檢測(cè)的結(jié)果產(chǎn)生影響，所以實(shí)際使用的情況要復(fù)雜的多。

其實(shí)如果抗原結(jié)構(gòu)沒有明顯缺陷，工藝正常發(fā)揮，那么不同廠家產(chǎn)品的整體陰陽(yáng)趨勢(shì)應(yīng)該是一致的。所以，在這種情況下，最好的方法應(yīng)該是做血清盤，包含N個(gè)陰性和N個(gè)陽(yáng)性，盡可能多的包含不同位點(diǎn)的抗體，不同類型的抗體，通過符合率來(lái)評(píng)價(jià)并保證產(chǎn)品的質(zhì)量。首先這需要大量的臨床樣本，其次需要深入結(jié)合臨床診斷，還要對(duì)抗體進(jìn)行表位分析和分型，這些事讓企業(yè)獨(dú)立來(lái)承擔(dān)顯然很難很難。

??傳染病產(chǎn)品

第一個(gè)吃螃蟹的人需要很強(qiáng)大的積累，因?yàn)檠簶颖镜墨@得一直是企業(yè)的痛點(diǎn)。沒有實(shí)際樣本，又要產(chǎn)品過硬，大家都知道閉門造車的成語(yǔ)了。所以我們不求第一個(gè)吃螃蟹，也不求跟著別人吃螃蟹，我們最需要的是喂螃蟹的人，比如有些項(xiàng)目國(guó)外可以買到BBI的商業(yè)盤，這種商業(yè)盤有各種廠家的檢測(cè)結(jié)果，類似于第三方質(zhì)控，你研發(fā)的產(chǎn)品能跟其他廠家符合上，下一步去做臨床試驗(yàn)肯定就胸有成竹了。國(guó)內(nèi)有些項(xiàng)目中檢所會(huì)發(fā)布國(guó)家盤，現(xiàn)在新冠的國(guó)家盤也有了，但是國(guó)家盤對(duì)外要有個(gè)過程…這還像你只能去飯店點(diǎn)螃蟹吃，味道合不合口，你只能隨廚師，這家不好吃，下次再換一家，但可能比上一家還難吃，最終能不能吃到合口的螃蟹，只能看緣分。如果能把螃蟹買回家，自己烹飪，這次清蒸不好吃，下次改紅燒，各種油鹽醬醋，口味自己實(shí)踐調(diào)整，總能做出一道好菜。

所謂兵馬未動(dòng)糧草先行，這類盤如在企業(yè)研發(fā)初期就可盡快獲得，并用于指導(dǎo)研發(fā)實(shí)踐的，如果有這么一個(gè)途徑，以國(guó)人的聰明勤奮，IVD領(lǐng)域也會(huì)像手機(jī)一樣，早日實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)替代。